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PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

空腸彎曲桿菌tPA (Plasminogen Activator, Tissue) ELISA Kit拉丁屬名: jejuni

生活飲用水  鈣、鎂 TAFI (Thrombin Activatable Fibrinolysis Inhibitor) ELISA Kit 拉丁屬名: 生活飲用水  鈣、鎂

食物鹽單胞菌FBL (Fibrillarin) ELISA Kit 拉丁屬名: Halomonas alimentaria

相思根瘤菌GHR (Growth Hormone Receptor) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

釀酒酵母FGα (Fibrinogen Alpha) ELISA Kit拉丁屬名: Saccharomyces  Cerevisiae

產(chǎn)黃青霉FGβ (Fibrinogen Beta) ELISA Kit 拉丁屬名: Penicillium chrysogenum

細極鏈格孢（可訂購）FGL2 (Fibrinogen Like Protein 2) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

產(chǎn)二素鏈霉菌FRA (Fibronection Related Antigen) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces ambofaciens

托木爾假單胞菌FSP (Fibroblast Surface Protein) ELISA Kit拉丁屬名: Pseudomonas tuomuerensis

枯草芽胞桿菌SOD2 (Superoxide Dismutase 2, Mitochondrial) ELISA Kit 拉丁屬名: Bacillus  subtilis

泛菌屬CKMT1A (Creatine Kinase, Mitochondrial 1A ) ELISA Kit 拉丁屬名: Pantoea  sp.

鷲峰假絲酵母CKMT1B (Creatine Kinase, Mitochondrial 1B ) ELISA Kit 拉丁屬名: Candida jiufengensis

派倫霉屬KRT10 (Keratin, Type I Cytoskeletal 10) ELISA Kit拉丁屬名: Peyronellaea  sp.

天藍色鏈霉菌SNRPD1 (Small Nuclear Ribonucleoprotein Polypeptide D1) ELISA Kit 用途: 代謝產(chǎn)物具有活性。

產(chǎn)朊假絲酵母SNRPC (Small Nuclear Ribonucleoprotein Polypeptide C) ELISA Kit 拉丁屬名: Candida utilis
殺蠣包拉米蟲探針法熒光定量PCR試劑盒供應(yīng)商Inhibin Alpha  抑制素α抗原去氧穿心蓮內(nèi)酯Deoxyandrographolide中藥標準品  分 子 式: C20H30O4 分 子 量: 334.4498

Inhibin beta A peptide  抑制素beta A抗原矮陀陀胺堿 APregn-5-en-20-amine,3-methoxy-N,N-dimethyl-, (3b,20S)- (9CI)對照藥材 分 子 式: C24H41NO 分 子 量:

Inhibin beta B  抑制素βB抗原雷帕霉素rapamycin from streptomyces*hygroscopicus中藥標準品  分 子 式: C51H79NO13 分 子 量: 914.18

Integrin Alpha3  整合素α3抗原丹參酮ITanshinone I中藥標準品  分 子 式: C18H12O3 分 子 量: 276.29

Integrin Beta5  整合素β5抗原橙花醇(Z)-3,7-Dimethylocta-2,6-dien-1-ol中藥標準品  分 子 式: C10H18O 分 子 量: 154.24932

Integrin alpha 1  整合素α1抗原內(nèi)源性生物素封閉液標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

Integrin Alpha4 Beta7/LPAM-1 (Lymphocyte Peyer’s patch Adhesion Molecule 1/Integrin alpha4,beta7)  整合素α4β7抗原牛蒡子苷元-4'-O-β-龍膽二糖苷Arctigenin-4'-beta-gentiobiosid化學標準品 分 子 式: C33H44O16 分 子 量: 696.693