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客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

暗孢節(jié)菱孢MIP4α (Macrophage Inflammatory Protein 4 Alpha) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

鴨艾美耳球蟲CTACK (Cutaneous T-cell Attracting Chemokine) ELISA Kit拉丁屬名: anatis

就地堆肥地芽孢桿菌sCD14 (Soluble Cluster of Differentiation14) ELISA Kit拉丁屬名: Geobacillus  toebii

大腸桿菌987P因子血清FcεRII/CD23 (Receptor II for the Fc Region of Immunoglobulin E) ELISA Kit規(guī)格: 0.5ml

異配囊接霉卵孢變種CD40L/TNFSF5 (Cluster of Differentiation 40 Ligand) ELISA Kit拉丁屬名: Mucor heterogamus var. moelleri

蘇云金芽孢桿菌蠟螟亞種CD163 (Cluster of Differentiation 163) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

釀酒酵母GP39 (Glycoprotein 39, Cartilage) ELISA Kit拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

白黃小脆柄菇CLU (Clusterin) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

泡盛曲霉CNTF (Ciliary Neurotrophic Factor) ELISA Kit 拉丁屬名: Aspergillus  awamori

雜色曲霉原變種TF (Tissue Factor) ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus versicolor var. versicolor

枯草芽孢桿菌CFD (Complement Factor D) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus subtilis

牛邊緣無漿體（獨(dú)山株）CRN (Corin) ELISA Kit拉丁屬名: bovis

麥芽糖假絲酵母CRP (C-Reactive Protein) ELISA Kit拉丁屬名: Candida maltosa

首爾鏈霉菌CX3CL1 (Chemokine C-X3-C-Motif Ligand 1) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces seoulensis

異常漢遜酵母GROα/CXCL1 (Growth Regulated Oncogene Alpha) ELISA Kit拉丁屬名: Hansenula  anomala
鮑癥病毒探針法熒光定量PCR試劑盒供應(yīng)商Beta-Amyloid(1-40)  β淀粉樣肽（1-40）（多肽蛋白）N-甲基荷葉堿N-Methylnuciferine化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C20H24NO2+ 分 子 量: 310.41006

A Beta1-40 (mutation type, MT) peptide  突變型β淀粉樣肽1-40甘草酸二銨鹽Diammonium glycyrrhizinate中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C42H62O16.2[H3N] 分 子 量: 856.99312

A Beta1-40 (H-3-me6;H-3-me13;H-3-me14; Beta-Amyloid 1-40)  β淀粉樣肽1-40（結(jié)構(gòu)改造）L-乳酸L(+)-Lactic acid化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C3H6O3 分 子 量: 90.08

A Beta29-40( Beta-Amyloid 29-40)  β淀粉樣肽29-40(野生型)隱色孔雀石綠N,N,N',N'-tetramethyl-4,4'-benzylidenedianiline化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式:  分 子 量:

A Beta29-42( Beta-Amyloid 29-42)  β淀粉樣肽29-42(野生型)黃質(zhì)寧2H-Cyclohepta[b]furan-2-one,6-[1-(acetyloxy)-3-oxobutyl]-3,3a,4,7,8,8a-hexahydro-7-methyl-3-methylene-,[3aR-[3aa,6(S*),7b,8ab]]- (9CI)對照藥材 分 子 式: C17H22O5 分 子 量:

Beta-Amyloid (1-42)  β淀粉樣肽（1-42）粉防己堿Tetrandrine中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C38H42N2O6 分 子 量: 622.75

Amyloid Beta 25-35( Beta-Amyloid 25-35)  β淀粉樣肽25-35（多肽）棕櫚酸甲酯Methyl palmitate中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C17H34O2 分 子 量: 270.45066