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客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
PCR反應鑒定——PCR反應條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

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磺胺喹噁啉單克隆抗體 小鼠單抗 0.2

磺胺對甲氧嘧啶單克隆抗體 小鼠單抗 0.1

鏈霉素單克隆抗體 小鼠單抗 0.5

四環(huán)素單克隆抗體 小鼠單抗 0.05

金霉素單克隆抗體 小鼠單抗 0.1

土霉素單克隆抗體 小鼠單抗 0.1

強力霉單克隆抗體 小鼠單抗 0.2

新霉素單克隆抗體 小鼠單抗 0.5

卡那霉素單克隆抗體 小鼠單抗 1

大觀霉素單克隆抗體 小鼠單抗 0.2

林可霉素單克隆抗體 小鼠單抗 0.2

泰樂菌素單克隆抗體 小鼠單抗 1

紅霉素檢測試劑盒 小鼠單抗 0.1

慶大霉素單克隆抗體 小鼠單抗 0.1

頭包類藥物單克隆抗體 小鼠單抗 0.5

頭包啦啶單克隆抗體 小鼠單抗 0.5

頭包噻呋單克隆抗體 小鼠單抗 0.5

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萊氏無膽甾原體探針法熒光定量PCR試劑盒 Acholeplasma laidlawii 

無色桿菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒 Achromobacter spp.

鮑氏不動桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 Acinetobacter baumannii

魯氏不動桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 Acinetobacter lwoffi

不動桿菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒 Acinetobacter spp.

枝頂孢霉探針法熒光定量PCR試劑盒 Acremonium strictum

伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 Actinobacillus actinomycetemcomitans

豬胸膜放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 Actinobacillus pleuropneumoniae

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牛型放線菌探針法熒光定量PCR試劑盒 Actinomyces bovis

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