在細胞培養(yǎng)的微觀世界中，懸浮細胞成簇現(xiàn)象宛如一場精妙的生命交響曲。這些原本應該獨立懸浮的細胞，在特定培養(yǎng)條件下會自發(fā)聚集，形成大小不一的細胞團塊，猶如夜空中璀璨的星團般引人注目。這種現(xiàn)象在生物制藥領域尤為常見，特別是在CHO細胞、HEK293細胞等常用工程細胞系的大規(guī)模培養(yǎng)過程中。

     從細胞生物學角度來看，這種成簇行為是細胞間相互作用的多維度體現(xiàn)。以下是懸浮細胞成簇或者成團的原因及解決方法

可能原因： 1、培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子 ； 2、支原體污染； 3、蛋白酶過度消化使得細胞裂解； 4、DNA污染 。

解決方法： 1、用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細胞，輕巧吹吸細胞獲得單細胞懸液； 2、分離培養(yǎng)物，檢測支原體； 3、用DNaseI(胰脫氧核糖核酸酶)處理細胞。針對懸浮細胞成簇或成團的問題，除了上述原因和解決方法外，還需結合實驗操作細節(jié)和細胞特性進一步優(yōu)化方案。

     若細胞因鈣、鎂離子導致聚集，可嘗試在消化后加入EDTA（乙二胺四乙酸）以螯合金屬離子，減少細胞間黏附。同時，吹打細胞時建議使用孔徑較小的移液槍頭，避免機械損傷，并采用低速離心（如200g，5分鐘）幫助細胞溫和沉淀。

     支原體污染常伴隨細胞生長緩慢或形態(tài)異常。若檢測確認污染，除常規(guī)抗生素處理外，可考慮使用支原體清除試劑（如Plasmocin），并定期進行PCR檢測以防復發(fā)。短期處理無效時，建議凍存重要細胞株并重新構建無菌培養(yǎng)體系。
     對于蛋白酶消化過度的問題，需根據(jù)細胞類型調整消化時間與酶濃度。例如，某些敏感細胞可改用低濃度胰酶（0.05%）或膠原酶替代，并在消化后立即用含血清培養(yǎng)基終止反應。此外，定期檢查消化液的活性，避免反復凍融導致效價下降。

    DNA污染的處理中，DNase I的使用需注意濃度與孵育時間（通常1-10 μg/mL，37℃作用15-30分鐘），處理后需徹底洗滌以避免殘留酶影響后續(xù)實驗。若細胞團塊仍頑固，可嘗試40 μm細胞篩過濾，但需評估篩網(wǎng)對細胞的剪切力影響。

    培養(yǎng)環(huán)境的穩(wěn)定性也至關重要。保持恒定的pH（7.2-7.4）、溫度（±0.5℃波動）及定期更換新鮮培養(yǎng)基，能減少細胞應激性聚集。對于某些特殊細胞系（如雜交瘤細胞），添加抗聚集成劑（如聚乙烯吡咯烷酮，PVP）可能改善分散性。

    通過多維度排查和精細化操作，可顯著提升懸浮細胞的單細胞率，為后續(xù)實驗提供更均一的樣本基礎。